هدف: طراحی یک روش تشخیص مولکولی سریع جهت تشخیص باکتری Yersinia pestis با صرف حداقل زمان و هزینه.مواد و روشها: واکنش زنجیرهای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction; PCR) بر روی ژنهای ویرولانس irp2, caf1, pla به صورت مالتیپلکس و یونیپلکس طراحی و انجام شد. پس از تعیین ویژگی به منظور تعیین حساسیت، ابتدا محصول PCR ژنهای pla و cfa1 در TA کلونینگ وکتور کلون شده و سپس کمترین غلظتی از پلاسمید حامل ژن که بتواند باند واضحی را روی ژل آگاروز ایجاد کند به عنوان حد تشخیص تعیین شد.یافته ها: نتایج PCR مربوط به سه ژن مذکور در هر دو شکل، به ترتیب قطعاتی با طول300bp ،400bp  و 520bp را ایجاد کرد. کمترین تعداد کپی قابل تشخیص مربوط به ژن pla،21  کپی و برای ژن 370caf1 کپی در یک واکنش 25 میکرولیتری به دست آمد. همچنین مثبت شدن واکنش هضم آنزیمی وجود محصولات PCR اختصاصی را تایید کرد.نتیجه گیری: با توجه به وجود کانون های طاعون خیز در ایران، این مطالعه میتواند در فراهم نمودن ابزار تشخیص مولکولی سریع و مطمئن برای ارزیابی جوندگان به منظور پایش مناطق تحت خطر بسیار موثر باشد. از طرفی روشهای طراحی شده در این مطالعه ابزاری دقیق، سریع و کم هزینه برای جستوجو و تشخیص این باکتری در موارد بیوتروریستی فراهم مینماید.

زمینه مطالعه: : نئوسپورا کانینوم تک یاخته انگلی بیماریزاست که به عنوان یکی از عوامل مهم ایجاد کننده سقط جنین عفونی گاو در سراسر جهان مطرح می باشد. هدف: هدف از این مطالعه بررسی و ردیابی حضور انگل نئوسپورا کانینوم در مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده در گاوداری های شهرستان اراک به روش ملکولی می باشد. روش کار: تعداد 38 نمونه مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده با روش ملکولی از نظر وجود انگل نئوسپورا مورد آزمایش قرار گرفت. نتایج: بررسی آماری یافته های مطالعه نشان دهنده این است که در 3/26 ٪ از مغز جنین های سقط شده DNA نئوسپورا کانینوموجود دارد و در مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده حضورDNA نئوسپورا کانینوم مشاهده نگردید. ارتباط آماری معنی داری بین آلودگی به انگل نئوسپورا کانینوم باسن مادر (تعداد زایش)، سابقه سقط و حضور سگ در گله وجود دارد. نتیجه گیری نهایی: نتایج تحقیق حاضر ارتباط معنی داری را بین آلودگی به نئوسپوروزیس و تعداد سقط های انجام شده در گاو های مورد بررسی نشان داد؛ به همین دلیل به نظر می رسد این تک یاخته را می توان از عوامل مهم همه گیری های سقط جنین در گله گاوهای مزرعه شیری شهرستان اراک به شمار آورد که لزوم نظارت مستمر در تشخیص و پیشگیری در صنعت گاوداری را گوشزد می نماید.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

زمینه مطالعه: عفونت های غذایی ناشی از کمپیلوباکتر یکی از عوامل گسترده التهابات معدی- روده ای در انسان می باشد که از نظر مسایل بهداشتی و زیان های اقتصادی در جامعه حائز اهمیت می باشد. هدف: بررسی شیوع آلودگی کمپیلوباکتر در نمونه های پوست مرغ های ارومیه، با استفاده از روش های کشت باکتریایی و واکنش های زنجیره ای پلیمراز می باشد. روش کار: 80 نمونه پوست مرغ از کشتارگاه پروتئین گستر سینا واقع در ارومیه به تعداد مساوی در طول فصل های زمستان و بهار جمع آوری شدند. قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر بعد از 24 ساعت نگهداری نمونه ها در شرایط یخچالی بررسی شد. نمونه های مثبت جهت استخراج DNA و انجام PCR مورد استفاده قرار گرفتند. به منظور بررسی فیلوژنتیکی جدایه ها، نمونه های مثبت PCR، توالی یابی شدند. نتایج: %58.75 از نمونه های پوست مرغ با استفاده از روش های کشت های باکتریایی، کمپیلوباکتر مثبت تشخیص داده شدند. نتایج مطالعه قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر در شرایط سرد بعد از 24 ساعت، نشان داد که کاهش قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر معنی دار نبوده و همچنین میزان آلودگی نمونه ها در فصل بهار بطور معنی داری بالاتر از فصل زمستان بود که ممکن است به دلیل بالا بودن درجه حرارت محیط و ایجاد شرایط مناسب برای کمپیلوباکتر باشد. نتیجه گیری نهایی: پوست مرغ از مخازن مهم کمپیلوباکتر بوده و این موضوع از لحاظ کنترل رعایت بهداشت عمومی در کلیه مراحل تولید تا عرضه محصولات طیور و همچنین انتقال آن به سایر قسمت های لاشه مرغ باید مورد توجه قرار گیرد.

سابقه و هدف: تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونه های بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری به ندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیری ها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روشهای تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از این مطالعه طراحی روش مولکولی PCR برای تشخیص سریع این ارگانیسم ها میباشد.مواد و روش ها: ژن bcsp که اختصاصی جنس بروسلا میباشد انتخاب و پرایمرهای اختصاصی آن به کمک نرم افزار 3.0v Primer express طراحی شد. برای تعیین ویژگی روش، ژنوم انواعی از باکتریهای کنترل منفی استفاده گردید. به منظور تعیین حساسیت و محاسبه حد تشخیص از کلونینگ محصولات PCR در پلاسمید pTZ57R/T استفاده شد.یافته ها: الکتروفورز محصول PCR ژن bcsp برای باکتریهای استاندارد B.abortus و B.melitensis باندی به اندازه 150 جفت باز نشان داد. آزمایشات PCR با استفاده از ژنوم باکتریهای کنترل منفی، هیچ باندی در ژل آگاروز ایجاد نکرد. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T  به کمک واکنش زنجیرهای پلیمراز و توالییابی تایید شد.بحث و نتیجه گیری: پرایمر طراحی شده برای ژن اختصاصی جنس بروسلا در این روش میتواند با حساسیت تشخیص 1500 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم به کار رود و به این ترتیب هزینه و زمان مورد نیاز برای تشخیص را کاهش دهد.

تحقیقات بر روی DNA در تشخیص، کنترل و درمان بسیاری از بیماری ها ازجمله سرطان اهمیت ویژه ای دارد. امروزه استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز دیجیتال قطره ای (ddPCR) برای آزمایشات مختلف بر روی DNA توجه محققان زیادی را جلب کرده است. برای انجام ddPCR به تعداد زیادی قطره با ابعاد میکرونی نیاز است. در مطالعه حاضر، یک سیستم ddPCR با استفاده از تراشه میکروفلوئیدیکی طراحی، ساخته و ارزیابی شد. این سیستم شامل یک تراشه میکروفلوئیدیکی برای تولید قطره و یک دستگاه تامین کننده چرخه های حرارتی مورد نیاز در PCR است. تولید قطره در ریزتراشه به صورت سه بعدی شبیه سازی شد. نتایج شبیه سازی اعتبارسنجی شد. خطای متوسط در شعاع قطرات تولیدشده حدود 5% است. دستگاه چرخه حرارتی ساخته شده، دمای تراشه را با دقت 1/5± درجه سانتی گراد کنترل می کند. فرآیند PCR درون تراشه با اعمال 25 چرخه حرارتی با موفقیت انجام شد. در اکثر قطرات خاصیت فلورسنت مشاهده شد که اثبات می کند دستگاه چرخه حرارتی شرایط تکثیر DNA را در آزمایشگاه به خوبی فراهم کرده است. تصاویر پردازش و سطوح مختلف نور فلورسنت در قطرات شناسایی شد. ضریب تغییرات قطرات انتخاب شده در برنامه پردازش، برابر با 2/5% است که در مقایسه با حالت قابل قبول برای این نوع سیستم ها (کمتر از 8%) دقت مطلوبی را ارایه می دهد. نتایج به دست آمده از این دستگاه کاملاً بومی، می تواند در زمینه های متعددی ازجمله تشخیص سرطان، بررسی بافت سرطانی و ارزیابی موفقیت عمل بافت برداری استفاده شود.

مقدمه و هدف: لیشمانیوز احشایی بیماریی است که با نام کالاآزار معروف میباشد و به وسیله گونه های لیشمانیای دونوانی، اینفانتوم و شاگاسی ایجاد می شود. لیشمانیوز احشایی در بیشتر مناطق ایران به صورت اسپورادیک و در مناطقی از استان های اردبیل و آذربایجان شرقی، فارس، بوشهر و قم به صورت آندمیک دیده می شود. مطالعات انجام شده مشخص نموده که لیشمانیوز احشایی در بعضی از مناطق استان کهگیلویه و بویراحمد وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی خصوصیات عامل ایجاد کننده لیشمانیوز احشایی در این استان انجام گرفته است.مواد و روش ها :در این مطالعه تجربی از 6 بیمار مبتلا به کالا آزار بستری شده در بخش اطفال بیمارستان امام سجاد (ع) یاسوج در سال 1384 نمونه مغز استخوان تهیه گردید. از اسلایدهای میکروسکوپی تهیه شده از این نمونه ها دی ان آ استخراج گردید و سپس جهت تعیین گونه انگل با روش واکنش زنجیرهای پلیمراز سمی نستد مورد بررسی قرار گرفتند. جهت این کار با استفاده از پرایمر LINR4 و LIN17 قطعه متغیر از حلقه های کوچک دی ان آ کینتوپلاستی انگل لیشمانیا در یک مرحله تکثیر گردید. محصول به دست آمده بر روی ژل آگاروز 1.5 درصد الکتروفورز شده و با اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی گردید. سپس از ژل حاوی باندها عکسبرداری گردید و با توجه به شاخص وزنی، گونه انگل مشخص گردید.یافته ها :با بررسی اسمیرهای مستقیم مغز استخوان، اماستیگوت های انگل (اجسام لیشمن) به تعداد نسبتا فراوان در نمونه های تهیه شده مشاهده شد و در دو مورد از بیماران، انگل پس از یک هفته در محیط دو فازی ان ان ان رشد نموده و سپس در محیط های تک فازی RPMI1640 و سرم جنین گوساله به مدت سه هفته انبوه سازی شد .نمونه حاصل از تمامی بیماران مورد مطالعه در آزمایش واکنش زنجیرهای پلیمراز ایجاد باندی به اندازه 720 جفت باز نمود. مقایسه این باندها با باندهای حاصل از گونه های استاندارد، مشخص نمود که گونه انگل در تمامی بیماران مورد مطالعه لیشمانیا اینفانتوم میباشد.نتیجه گیری: عامل مولد لیشمانیوز احشایی (کالاآزار) در منطقه مورد مطالعه لیشمانیا اینفانتوم می باشد. ضروری است مطالعات جامع در خصوص مخازن این بیماری در این استان انجام گیرد تا به همراه بررسیهای سرواپیدمیولوژیک جنبه های مختلف این بیماری مشخص گردد.

گونه یPhytophthora erythroseptica، عامل پوسیدگی صورتی سیب زمینی، یکی از اُاُمیست های بیماری زای گیاهی است که خسارت اقتصادی قابل توجهی را در مزرعه و انبار وارد می کند. به منظور شناسایی و ردیابی دقیق و حساس P. erythroseptica، شش توالی هسته ای و میتوکندریایی برای طراحی آغازگرهای اختصاصی مورد بررسی قرار گرفت. به دلیل شباهت زیاد توالی-های P. erythroseptica به خویشاوندان نزدیکش، تنها یک توالی هسته ای (TigA) برای طراحی آغازگرهای اختصاصی مناسب تشخیص داده شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی طراحی شده، شیوه ای از واکنش زنجیره ای ساده و تودرتو برای شناسایی و ردیابی P. erythroseptica ابداع شد. اختصاصیت آغازگرهای طراحی شده با استفاده از مجموعه ای از گونه های فیتوفتورا متعلق به تبارهای فیلوژنتیکی مختلف و نیز خویشاوندان نزدیک P. erythroseptica ارزیابی شد. ردیابی P. erythroseptica در دی ان ای خالص بیمارگر و دی ان ای استخراج شده از بافت های گیاهی آلوده شامل سیب زمینی، گوجه فرنگی و اسفناج با استفاده از آغازگرها با موفقیت انجام شد. آغازگرهای اختصاصی10 پیکوگرم از دی ان ای خالص P. erythroseptica را در واکنش زنجیره ای پلیمراز ساده ردیابی کردند، با این حال واکنش زنجیره ای پلیمراز تودرتو، حساسیت آغازگرها را حداقل صد برابر افزایش داد. همچنین، آغازگرهای اختصاصی قادر به ردیابی P. erythroseptica به عنوان والد پدری یا مادری در جدایه های دورگ بودند؛ این ویژگی به شناسایی یکی از والدین در دورگ های P. erythroseptica کمک شایانی می کند.

سل گاوی یکی از مهمترین بیماریهای مشترک بین انسان و دام در تمام جهان است. در سالهای اخیر موارد ابتلا به سل انسانی با منشا گاوی در حال افزایش بوده و بهداشت جامعه را مورد مخاطره قرار داده است. مایکوباکتریوم بوویس عامل سل گاوی بوده و علاوه بر ابتلا حیوانات مزرعهای و پستانداران وحشی باعث ایجاد مخزن در بین آنها شده و امر کنترل بیماری را مشکل میسازد. هدف از این مطالعه جستجوی مایکوباکتریوم بوویس در خون و عقدههای لنفاوی گاوهای مشکوک به بیماری سل گاوی با روش PCR است که با استفاده از جفت پرایمرهایJB21 – JB22 یک قطعه از ژنوم M. bovis را به اندازه bp 500 مورد شناسایی قرار میدهد. در مطالعه حاضر از 100 راس گاو مشکوک به بیماری سل، نمونه گیری انجام شد و نمونه ها پس از آلودگی زدایی با روش پتروف با رنگ آمیزی ذیل نیلسن مورد آزمایش مستقیم میکروسکوپی قرار گرفته و در محیط کشت لونشتاین جانسون حاوی پیرووات سدیم کشت داده شدند. برای انجام آزمایش PCR از نمونه ها عمل استخراج DNA با استفاده از CTAB و پروتئیناز K انجام گرفت. محصول نهاییPCR  تحت الکتروفورز در ژل آگارز قرار گرفته و به وسیله اتیدیوم برماید آشکارسازی گردید. از 100 نمونه مشکوک، 1 مورد (1%) در روش ذیل - نیلسن، 2 مورد (2%) در روش کشت میکروبی و 8 مورد ( 8%) در آزمایش PCR مثبت به ثبت رسیدند. نتایج نشان میدهد روش PCR با جفت پرایمرهای  JB21 – JB22با حساسیت و ویژگی بالا، بهترین روش جستجوی مایکوباکتریوم بوویس در دامهای آلوده به بیماری سل گاوی است.

متن کامل مقاله های این شماره به زبان انگلیسی می باشد، لطفا برای مشاهده متن کامل مقالات به بخش انگلیسی مراجعه فرمایید.لطفا برای مشاهده متن کامل این مقاله اینجا را کلیک کنید.